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水質葉綠素a檢測步驟詳解(水質葉綠素a檢測國標方法)
作者:霍爾德電子 更新時間:2026-06-09
葉綠素a經常用于表征浮游藻類的生物量水平。因此,也可通過測定葉綠素a等光合色素反映水體的富營養化程度。《水質 葉綠素a的測定 分光光度法》(HJ 897-2017)規定了在實驗室測定葉綠素a的丙酮萃取分光光度法,通過抽濾、研磨、萃取、離心和比色測定葉綠素a含量。雖然在實際工作中提出了用反復凍融取代研磨、用乙醇代替丙酮萃取等提高提取效率的優化方法,但仍然存在葉綠素a容易在繁瑣的實驗過程中發生光降解的問題,所以需要在操作中盡量避光降低影響。

水質葉綠素a檢測步驟詳解:
1.提取試劑
除熱乙醇法,國內外標準方法均采用90%丙酮作為提取試劑。EPA446.0指出,90%丙酮溶液可以有效提取大部分藻類細胞中的葉綠素a,而且不產生其他衍生物。丙酮是國際上較為公認的提取葉綠素的試劑
2.濾膜
除《水和廢水檢測分析方法(第四版)》采用乙酸纖維濾膜外,均采用玻璃纖維濾膜。
3.樣品保存方法
樣品的保存條件各種方法略有不同,但水樣采集后均保證4℃冷藏保存,樣品濾膜可冷凍保存。而且葉綠素a測定樣品濾膜冷凍后再研磨,可提高提取效率。暨南大學水生生物研究所的林少君在《浮游植物中葉綠素a提取方法的比較與改進》的研究結果。如采樣后不立刻測定,-18℃下冰凍,再于室溫條件下融解,利用細胞內冰粒的形成和細胞液濃度的增高引起溶漲,使胞壁結構破碎引起葉綠素溶出。
4.是否研磨及研磨后是否需要浸泡
雖然研磨的方法較為費力,但是該方法操作簡單,儀器設備要求低,常溫操作不會對葉綠素a造成破壞,細胞破碎完全,對葉綠素的提取速度快,效率高,并在環境監測系統廣泛應用,考慮到方法的經典性和數據的可沿用性,新的技術線路中關于對葉綠素a的提取步驟沿用《水和廢水監測分析方法(第四版)》中的研磨方法,研磨提取葉綠素a,主要通過機械作用破壞藻類的細胞壁和葉綠體使葉綠素a溶解于丙酮,并在此基礎上進行改進。
5.計算公式及波長
關于計算方法,主要有三色法和單色法,三色法主要考慮了葉綠素b和葉綠素c對測定的干擾,測定的是表觀葉綠素a的含量(包括葉綠素a與脫鎂葉綠素a之和),單色法考慮脫鎂葉綠素a的干擾。從方法的簡便性來說,三色法操作簡單,產生誤差幾率小,耗時比單色法短;目前《水和廢水監測分析方法(第四版)》中測定葉綠素a的方法在地表水環境監測中應用最為廣泛,該方法采用丙酮研磨提取葉綠素a,用三色法計算葉綠素a的濃度。

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